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PCR儀中的PCR反應(yīng)過(guò)程你知道嗎?

發(fā)布時(shí)間: 2020-05-06  點(diǎn)擊次數(shù): 1339次
   PCR儀根據(jù)DNA擴(kuò)增的目的和檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)可以分普通PCR儀、梯度PCR儀、原位PCR以及實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀等幾類(lèi)。
  一般把一次PCR擴(kuò)增只能運(yùn)行一個(gè)特定退火溫度的PCR儀,稱(chēng)之為普通PCR儀。如果要用它做不同的退火溫度則需要多次運(yùn)行。主要是用作簡(jiǎn)單的,對(duì)目的基因退火溫度的擴(kuò)增。主要應(yīng)用于科研、教學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、檢驗(yàn)、檢疫等。
  PCR儀的PCR反應(yīng)過(guò)程與細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制相似,但PCR的反應(yīng)體系要簡(jiǎn)單的多,主要包括DNA靶序列、引物、4種單核苷酸dNTP、耐熱DNA聚合酶以及合適的緩沖液體系。
  PCR反應(yīng)過(guò)程有以下3個(gè)步驟:
  1.變性
  將反應(yīng)體系混合物加熱到94℃,維持較短時(shí)間(大約15-30 s),使目標(biāo)DNA雙螺旋的氫鍵斷裂,形成單鏈DNA作為反應(yīng)模板。
  2.退火
  將反應(yīng)體系冷卻至特定的溫度(引物的TM值左右或以下),引物與DNA模板的互補(bǔ)區(qū)結(jié)合,形成模板引物復(fù)合物。
  3.延伸
  將反應(yīng)體系的溫度提高到72℃并維持一段時(shí)間,引物在耐熱聚合酶的作用下,以引物為固定起點(diǎn),以4種單核苷酸(dNTP)作為底物合成新的DNA鏈。
  以上三步驟作為一個(gè)循環(huán)重復(fù)的進(jìn)行,每一循環(huán)的產(chǎn)物作為下一循環(huán)的模板。如此循環(huán)數(shù)十次,從而使目的基因得到指數(shù)級(jí)擴(kuò)增,達(dá)到檢測(cè)或獲取基因的目的。
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